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Mynox® 支原體去除試劑

產品簡介

Mynox是目前*可殺滅支原體的生物制劑
有效去除細胞培養及病毒保存中支原體的污染

產品型號：

更新時間：2016-12-11

廠商性質：代理商

訪問量：3424

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生物試劑

試劑

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產品說明：

Mynox是目前*可殺滅支原體的生物制劑

有效去除細胞培養及病毒保存中支原體的污染
規格：2次，5次，10次

特點：

*殺死支原體
Mynox是*種也是*的以殺死支原體來去除污染的生物試劑。它取自枯草桿菌發酵以后的提取物，基于生物物理原理，特異性的與支原體膜結合，使其通透性改變，導致支原體迅速死亡。
對細胞無害
Mynox不會與細胞膜結合，故細胞毒性極低。
高效
實驗證實，Mynox在三小時左右即可*的去除支原體。
非抗生素
無耐藥菌株的產生

支原體去除試劑Mynox使用常見問題 Mynox說明書

相關文獻：Mynox文獻

所屬公司：德國Minerva Biolabs公司產品
所屬類別：支原體檢測、去除、預防試劑

Mynox® 支原體去除試劑

1. 試劑及材料

1.1 試劑盒組分

操作手冊

Mynox試劑：無菌、即用型溶液（PBS緩沖液），PH 7.4，220 µl/管

Cat. No. 10-0200 2 管

Cat. No. 10-0500 5 管

Cat. No. 10-1000 10 管

1.2 穩定性與保存

Mynox在有效期（見包裝盒標簽）內具有很強的穩定性。應于2-8°C保存。

運輸過程中，應保持室溫。

1.3 其他所需的試劑及設備

標準細胞培養設備

培養基、胎牛血清、PBS緩沖液、胰酶

無菌培養皿

Venor®GeM支原體檢測試劑盒（Minerva Biolabs公司）

2. 應用及原理

不論從生物學還是經濟學角度考慮，去除細胞培養中的支原體感染，對于基礎研究、診斷和生物技術的生產都是至關重要的。應用抗生素處理是殺滅或抑制細胞培養中支原體污染的zui常用方法。一般來說，抗生素治療不但不能有效持久地去除支原體，而且，抗生素還容易對細胞產生不良的細胞毒作用，并引起支原體菌株的耐藥性。

目前，Mynox是*種也是*可殺滅支原體的生物制劑。實驗證實，Mynox僅使用一次即可*有效的消除支原體。

Mynox取自枯草桿菌發酵后的提取物。由于支原體沒有細胞壁，只有簡單的質膜，因此，Mynox基于生物物理原理，只與支原體膜特異性結合，改變支原體膜的通透性，導致支原體破裂死亡，而細胞膜不與Mynox結合，從而，不會改變細胞的任何特性，故細胞毒性極低。支原體殺死后，細胞能夠很快恢復其正常的生長與繁殖狀態。

注意：Mynox僅限于基礎研究使用。

3. 樣品材料

3 .1 血清濃度的重要性

反應混合物中脂肪和蛋白質的濃度可影響Mynox消除支原體的活性，例如：胎牛血清的濃度。這些成分可阻止Mynox與支原體膜的結合。因此，消除細胞培養中的支原體，應使用特定的標準細胞培養基，例如：D-MEM或RPMI 1640培養基。如果使用Mynox消除污染細胞中的支原體，胎牛血清的*濃度為5%。如果使用Mynox消除病毒中的支原體，建議使用無血清的培養基。

3.2 Mynox的使用范圍

由于Mynox不與細胞膜結合，因此，它不能消除細胞內的支原體污染。然而，支原體污染通常發生在細胞外，只有penetrans種屬的支原體能夠進入細胞內，但是，迄今為止，尚未有關于penetrans種屬支原體引起污染的報道。另外，為了減小血清對消除支原體的影響，還需制定適用于消除高蛋白、高脂情況下的支原體污染的方案。

Mynox利用生物物理的方法，與支原體膜結合，因此，Mynox必須直接接觸支原體，才能有效殺除。我們建議使用胰酶消化細胞，使細胞充分脫落分離，與Mynox充分接觸，從而，更有效地殺除支原體。

3.3 Mynox是否對細胞有損傷

同其他消除支原體的產品相比，Mynox對于貼壁和非貼壁系細胞的影響不大。通過對眾多細胞系的測試，我們發現治療后的細胞，不但支原體被*殺除，而且，移種后的細胞仍然能夠保持正常的高增殖率。

4. 說明

4.1 貼壁細胞系支原體的去除

4.1.1 污染細胞和Mynox混合物的準備

在直徑為6cm的無菌培養皿中，將污染細胞與Mynox混合

1. 加入2.8ml含有5%v/v胎牛血清的標準培養基

2. 加入Mynox 200 µl（1管）

3. 加入2 ml 細胞密度為1x10⁴至 1x10⁵的污染細胞

混合物總體積為5ml。

注意：

1．確保對單一細胞進行支原體殺除（顯微鏡下觀察!）。可根據需要延長胰酶消化時間。

2．在加入污染細胞前，確保Mynox®已被添加在培養基中。將污染細胞直接加入到Mynox混合物中。

4.1.2 去除支原體

在正常細胞培養的條件下，將Mynox與污染細胞的混合物進行2個小時的培養，然后，棄去上清液，再加入標準的細胞培養基。將去除支原體后的細胞繼續進行傳代培養。

注意：

在污染細胞去除支原體期間，應經常觀察Mynox對細胞的影響。如果發現細胞狀態不佳，應立即停止反應，添加標準培養基，將Mynox混合物按1:5稀釋。

4.2 懸浮細胞系支原體的去除

4.2.1 污染細胞和Mynox混合物的準備

將污染細胞與Mynox混合在無菌離心管中

1. 加入1.6ml 0.125%的胰酶和5mM EDTA PBS緩沖液

2. 加入Mynox 200 µl（1管）

3. 轉移1.6 ml含有10%v/v胎牛血清的標準培養基和細胞密度為1x10⁴至 1x10⁵的污染細胞

混合物總體積為3.4ml。

注意：

1．確保對單一細胞進行支原體殺除（顯微鏡下觀察!）。可根據需要延長胰酶消化時間。

2．在加入污染細胞前，確保Mynox®已被添加在培養基中。將污染細胞直接加入到Mynox混合物中。

3．確保離心管中污染細胞與Mynox的混合物為液態。

胰酶可防止細胞聚集。如果，去除支原體過程中，不需要使用胰酶進行細胞分離，可添加PBS緩沖液，以保證細胞與Mynox混合物的總體積為3.4 ml。

4.2.2 去除支原體

1. 室溫下，輕輕搖勻混合物2小時。

2. 將細胞團離心5分鐘（600 x g）并棄去上清液。

3. 在不含Mynox的培養基中將細胞重懸。

去除支原體更有效的方法是：將污染細胞在含有Mynox的培養基中培養1代。將污染細胞加入到5 ml含有5 % v/v 胎牛血清的培養基和150 µl Mynox的混合物中培養3天，然后，離心并棄去上清液，再繼續在不含Mynox的培養基中進行傳代培養。

注意：

4.3 無包被病毒支原體的去除

4.3.1 污染細胞和Mynox混合物的準備

凍存或新鮮的細胞以及不含細胞碎片的懸浮液均可進行支原體殺除。病毒的滴度不影響去除效果，將污染細胞與Mynox混合在15ml無菌管中：

將污染細胞與Mynox混合在無菌離心管中

1. 加入1ml不含胎牛血清的標準培養基

2. 加入Mynox 100 µl

3. 將125 µl病毒株和8%v/v的胎牛血清加入到上述混合液中

混合物總體積為1.225 ml。

注意：

確保反應管中污染細胞與Mynox的混合物為液態。

4.3.2 去除支原體

1. 將污染細胞與Mynox的混合物室溫下培養2小時，并輕輕搖勻。

2. 在培養基中，將Mynox稀釋為1:10時，反應結束。

在進行此步驟時，可以通過去除宿主細胞系的支原體污染，同時達到去除病毒中支原體污染的目的。zui后的體積應達到混合液體積的10倍。

注意：

在被支原體污染之前，首先要檢測宿主細胞系是否有支原體污染。

4.4 包被病毒支原體的去除

包被病毒外層的脂質膜成分與支原體膜相似，也是Mynox結合的對象。根據使用Mynox的濃度和作用時間，這些病毒極易被Mynox殺除。為了能夠*殺除支原體，預殺除支原體的病毒的滴度應高于106 TCID50。

4.4.1 污染細胞和Mynox混合物的準備

凍存或新鮮的細胞以及不含細胞碎片的懸浮液均可進行支原體殺除。將污染細胞與Mynox混合在15ml無菌管中：

1. 加入4.4ml不含胎牛血清的標準培養基

2. 加入Mynox 100 µl

3. 將0.5 ml病毒株和8%v/v的胎牛血清加入到上述混合液中

混合物總體積為5 ml。

注意：

確保反應管中污染細胞與Mynox的混合物為液態。

4.4.2 去除支原體

將污染細胞與Mynox的混合物室溫下培養2小時，并輕輕搖勻。在培養基中，將Mynox稀釋為1:10時，反應結束。在進行此步驟時，可以通過去除宿主細胞系的支原體污染，同時達到去除病毒中支原體污染的目的。zui后的體積應達到混合液體積的10倍。

注意：

在被支原體污染之前，首先要檢測宿主細胞系是否有支原體污染。這個支原體去除過程，可多次用于病毒株的殺除，以確保所有支原體已被殺除。

5. 支原體檢測

在不添加抗生素的情況下，經Mynox去除的細胞培養物和病毒株應繼續傳代培養4代，然后，進行支原體污染的再測定。我們建議使用高敏感度的Venor®GeM支原體檢測試劑盒（Cat.-No. 11-1025/1050/1100/1250），以測定支原體去除的效果。該試劑盒應用的PCR檢測法，但是，去除支原體后，不宜立即采用PCR檢測。因為，Mynox可改變支原體膜的通透性，使支原體破裂死亡，進而，達到殺除支原體的目的，同時，支原體DNA也會釋放到培養基中，此時，應用PCR法檢測，就可檢到支原體DNA，從而，造成錯誤的陽性結果。在繼續傳代培養1-2代后，由于培養基的更換，細胞外不再含有支原體DNA。

上一個：MPBIO支原體去除試劑-MRA