ALSTEM是一家位于灣區(qū)的早期生物技術(shù)公司，擁有快速擴(kuò)展的產(chǎn)品和服務(wù)組合，為生物制藥和學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu)提供服務(wù)。受到加利福尼亞干細(xì)胞研究承諾的啟發(fā)，ALSTEM于2012年由具有iPS細(xì)胞重編程和基因組編輯技術(shù)專業(yè)知識(shí)的科學(xué)家創(chuàng)立。

NanoFect轉(zhuǎn)染試劑：＃NF100

產(chǎn)品描述

NanoFect Transfection Reagent是一種*的聚合物混合物，與的脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑盒相比，可以更低的成本向細(xì)胞提供更多的DNA和siRNA。NanoFect™是一種功能強(qiáng)大，適用范圍廣泛的轉(zhuǎn)染試劑，可有效，可重復(fù)轉(zhuǎn)染。

• 概觀
• 程序

NanoFect試劑在DNA和RNA存在下自組裝納米顆粒。這些復(fù)合物很容易被靶細(xì)胞吸收，從而有效地進(jìn)行基因遞送。由于NanoFect在抗生素和血清存在下起作用，因此無(wú)需更換培養(yǎng)基。這種易于使用的方案，在直接添加到靶細(xì)胞之前快速一步孵育15分鐘，使NanoFect非常適合高通量轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。

為了高轉(zhuǎn)染效率和低毒性，以高密度轉(zhuǎn)染細(xì)胞。建議使用50-80％的融合度。

細(xì)胞應(yīng)在轉(zhuǎn)染前18至24小時(shí)接種，以使細(xì)胞密度在轉(zhuǎn)染時(shí)達(dá)到50~80％匯合。在轉(zhuǎn)染前2小時(shí)，向每個(gè)孔中新鮮加入含有血清和抗生素的*培養(yǎng)基。

以下方案用于在24孔板中轉(zhuǎn)染，參見(jiàn)表1用于其他培養(yǎng)形式的轉(zhuǎn)染。

1.對(duì)于每個(gè)孔，在轉(zhuǎn)染前2小時(shí)新鮮加入0.5ml正常生長(zhǎng)培養(yǎng)基（抗生素不影響結(jié)果）。

2.對(duì)于每個(gè)孔，在50μl不含血清的DMEM中稀釋0.5μgDNA，并輕輕混合。

3.將1μlNanoFect試劑加入另一個(gè)含有50μl不含血清的DMEM的試管中，輕輕混勻。

4.將NanoFect / DMEM添加到DNA / DMEM溶液中。通過(guò)渦旋混合5-10秒。

5.在室溫下孵育約15分鐘，以使NanoFect / DNA復(fù)合物自組裝。

6.將100μlNanoFect/ DNA混合物逐滴添加到每個(gè)孔中的細(xì)胞中，并通過(guò)輕輕旋轉(zhuǎn)平板使其均質(zhì)化。

7.將平板放回細(xì)胞培養(yǎng)箱中。

8.轉(zhuǎn)染后24至48小時(shí)檢查轉(zhuǎn)染效率。

表1.不同文化的推薦量

注意：對(duì)于不同的細(xì)胞類型，NanoFect（μL）：DNA（μg）的適合比例約為3：1。我們建議將NanoFect（μL）：DNA（μg）比例為2：1作為起點(diǎn)，通常可以提供令人滿意的轉(zhuǎn)染效率和不可見(jiàn)的細(xì)胞毒性，但NanoFect的量可以從2到4μl/μgDNA調(diào)整，具體取決于要轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系。為確保NanoFect / DNA復(fù)合物顆粒的宜尺寸，我們建議使用含有高葡萄糖的無(wú)血清DMEM稀釋DNA和NanoFect Reagent。

上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司是實(shí)驗(yàn)試劑一站式采購(gòu)服務(wù)商

1：強(qiáng)大的進(jìn)口輻射能力，血清、抗體、耗材、大部分限制進(jìn)口品等。

2：產(chǎn)品種類齊全，經(jīng)營(yíng)超過(guò)700多品牌，基本涵蓋所有生物實(shí)驗(yàn)試劑耗材。

3：提供加急服務(wù)，貨品一般1-2周到貨。

4：富有競(jìng)爭(zhēng)良好的信譽(yù)，大部分客戶提供貨到付款服務(wù)。客戶包括清華、北大、交大、復(fù)旦、中山等100多所高校，ROCHE，阿斯利康、國(guó)藥、fisher等知藥企。

6：我們還是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech；sysy,TriLink BioTechnologies,Inc；worthington-biochem,zyagen等幾十家國(guó)外公司授權(quán)代理。

7：我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批發(fā)，歡迎合作。