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使用PNA miRNA抑制劑的方案

發(fā)布時間:2018/9/5點(diǎn)擊次數(shù):791

PNA BIO INC致力于為基礎(chǔ)研究和應(yīng)用領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)室提供的研究產(chǎn)品和服務(wù)。

PNA Bio提供PNA(Peptide Nucleic Acid)產(chǎn)品,包括定制寡核苷酸,F(xiàn)ISH探針,miRNA抑制劑,PNA鉗夾探針和Fmoc單體。HPLC純化后,它們與MS / MS數(shù)據(jù)一起提供> 95%的純度。PNA產(chǎn)品由Panagene制造。

PNA Bio還提供工程化核酸酶服務(wù),包括CRISPR / Cas9核酸酶(RGEN)合成,驗(yàn)證和Cas9蛋白以及敲除和敲入細(xì)胞系服務(wù)。

PNATM miRNA抑制劑   PNA miRNA Inhibitors

由于PNA比DNA或RNA更強(qiáng)地結(jié)合互補(bǔ)RNA,因此相對于基于RNA / DNA的miRNA抑制劑,它提供了更高的活性。此外,PNA miRNA抑制劑與細(xì)胞穿透肽(CPP)結(jié)合,使其無需轉(zhuǎn)染試劑即可進(jìn)入細(xì)胞。
已經(jīng)顯示PNA miRNA抑制劑的使用是體內(nèi)有價值的工具。

主要特征

 PNAs™miRNA抑制劑具有高度序列特異性

 

 可以在不使用轉(zhuǎn)染試劑的情況下使用PNAs TM miRNA抑制劑

 

 可以在不使用轉(zhuǎn)染試劑的情況下使用PNAs TM miRNA抑制劑

 

 PNAs™miRNA抑制劑在細(xì)胞中具有長的半衰期,長達(dá)14天

 

 PNAs™miRNA抑制劑具有抗性和非常穩(wěn)定的細(xì)胞核酸酶

 

 PNAs™miRNA抑制劑沒有細(xì)胞毒性

目錄號

描述

尺寸

PI - XXXX - 10

PNAs™miRNA抑制劑

10納摩爾

PI - XXXX - 25

PNAs™miRNA抑制劑

25納摩爾

PN - 1001 - 10

PNAs™miRNA抑制劑陰性對照

10納摩爾

PN - 1001 - 25

PNAs™miRNA抑制劑陰性對照

25納摩爾

PI - XXXX - FAM

PNAs™miRNA抑制劑

5納摩爾

PN - 1001 - FAM

PNAs™FAM - 標(biāo)記為陰性對照

5納摩爾

 

使用PNA miRNA抑制劑的方案

 

PNATM miRNA抑制劑是針對成熟形式的miRNA而設(shè)計(jì)的。由于pna相對于dna具有較好的親和力和特異性,是一種理想的分子生物學(xué)工具。 證明miRNA作為一種抗感試劑的作用。

 

我們的PNATM miRNA抑制劑與細(xì)胞穿透肽結(jié)合,只需將其添加到培養(yǎng)基中即可進(jìn)入細(xì)胞。使用轉(zhuǎn)染試劑可促進(jìn)穿透。 miRNA抑制劑進(jìn)入細(xì)胞。一般情況下,4~6小時后,細(xì)胞內(nèi)可見PNA miRNA抑制劑。大效應(yīng)出現(xiàn)在24~48小時之間。因?yàn)镻NA對核酸酶和Pr都有抗性 抑制作用持續(xù)一周以上。

 

 

PNA miRNA抑制劑的治療

 

細(xì)胞電鍍

 

1.轉(zhuǎn)染前1d,種子5.0×104細(xì)胞在0.5ml中接種24孔板,1.5×105細(xì)胞在1.5ml中接種6孔板,在合適的*培養(yǎng)基中不加抗生素。

 

在一夜之間培養(yǎng)細(xì)胞

 

PNA miRNA抑制劑的制備

 

順著含有miRNA抑制劑的管子旋轉(zhuǎn)。

 

在125升UL水溶液中,用50μL水或25毫摩爾回流10毫摩爾管,制成200μm原料。如果不*溶解,在60℃加熱5min。

 

商店里-70華氏度。

 

  • PNA miRNA抑制劑如果保存得當(dāng),其溶液應(yīng)穩(wěn)定在1年以上。

 

 

miRNA抑制劑的治療

 

(選項(xiàng))將每口井的培養(yǎng)基替換為優(yōu)選培養(yǎng)基,如OPTIMEM或*不含抗生素的培養(yǎng)基。

 

在60℃下加熱PNA miRNA抑制劑10 min。

 

在OPTI-MEM中制備miRNA抑制劑混合物,用或不加轉(zhuǎn)染試劑孵育15 min。

 

*在有轉(zhuǎn)染試劑的情況下,miRNA抑制劑的推薦濃度為0.2~0.5μm(每200 ul培養(yǎng)基0.5ul),或1~2μm未轉(zhuǎn)染試劑。

 

向細(xì)胞中加入miRNA混合物。

 

細(xì)胞孵育48小時。

 

*宜條件將由用戶根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。

  • 實(shí)時PCR評價

 

  • 從培養(yǎng)的細(xì)胞中去除生長培養(yǎng)基。

 

  • 根據(jù)制造商的指示,分別使用PureLink™RNA試劑盒或miRNA分離試劑盒(LifeTechnologies)從樣品中提取總RNA或miRNA。

 

  • **不使用TrIZOL進(jìn)行總RNA提取,因?yàn)镻NA-miRNA復(fù)合物被TrIZOL解離。

 

  • 三。使用TaqMan®microRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Apple BioSosits)進(jìn)行10 ng總RNA或miRNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。TaqMan®Unvior的實(shí)時PCR反應(yīng) AL PCR碩士混合(應(yīng)用生物系統(tǒng))根據(jù)制造商的指示。

 

參考

Oh SY et al. (2010) PNA-based antisense oligonucleotides for micrornas inhibition in the absence of a transfection reagent. Oligonucleotides 20(5):225-30.

 

Fabbri E et al. (2011) Modulation of the Biological Activity of microRNA-210 with Peptide Nucleic Acids (PNAs). Chem Med Chem 6(12):2192-2202.

 

Jiang L et al. (2011) Identification and experimental validation of G protein alpha inhibiting activity polypeptide 2(GNAI2) as a microRNA-138 target in tongue squamous cell carcinoma. Hum Genet 129(2):189-97

 

Gaglione M et al. (2011) PNA-based artificial nucleases as antisense and antimiRNA oligonucleotide agents. Mol Biosyst 7(8):2490-9

 

 

Pnabio 部分產(chǎn)品列表

貨號

品名

規(guī)格

品牌

CP01-20

Reconstitutes to 1 mg/ml, 120 pmol (6 uM x 20 ul)

20 ug

pnabio

CP01-50

Reconstitutes to 1 mg/ml, 300 pmol (6 uM x 50 ul)

50 ug

pnabio

CP01-200

Reconstitutes to 1 mg/ml, 1200 pmol (6 uM x 200 ul)

200 ug (50 ug x 4)

pnabio

CP02

Reconstitutes to 5 mg/ml, 1530 pmol (30 uM x 50 ul)

250 ug

pnabio

CP03

Reconstitutes to 5 mg/ml, 6000 pmol (30 uM x 50 ul x 4 tubes)

1 mg (250 ug x 4)

pnabio

CP04-100

Liquid form 1 mg/ml, 600 pmol (6 uM x 20 ul x 5 tubes)

100 ug (20 ug x 5)

pnabio

CP04-500

Liquid form 5 mg/ml, 3000 pmol (30 uM x 20 ul x 5 tubes)

500 ug (100 ug x 5)

pnabio

CN01

Reconstitutes to 1 mg/ml, 300 pmol (6 uM x 50 ul)

50 ug

pnabio

CN02

Reconstitutes to 5 mg/ml,1530 pmol (30 uM x 50 ul)

250 ug

pnabio

CD01

Reconstitutes to 1 mg/ml,  300 pmol (6 uM x 50 ul)

50 ug

pnabio

CD02

Reconstitutes to 5 mg/ml,1530 pmol (30 uM x 50 ul)

250 ug

pnabio

F1001

C-rich telomere probe, FAM labeled

5 nmole

pnabio

F1002

C-rich telomere probe, Cy3 labeled

5 nmole

pnabio

F1003

C-rich telomere probe,  Cy5 labeled

5 nmole

pnabio

F1004

C-rich telomere probe, Alexa Fluor 488 labeled

5 nmole

pnabio

F1005

G-rich telomere probe, FAM labeled

5 nmole

pnabio

F1006

G-rich telomere probe, Cy3 labeled

5 nmole

pnabio

F1007

G-rich telomere probe, Cy5 labeled

5 nmole

pnabio

F1008

G-rich telomere probe, Alexa Fluor 488 labeled

5 nmole

pnabio

F1009

C-rich telomere probe, FITC labeled

5 nmole

pnabio

F1010

G-rich telomere probe, FITC labeled

5 nmole

pnabio

F1013

   C-rich telomere probe,     Alexa Fluor 647 labeled

5 nmole

pnabio

F1014

   G-rich telomere probe,   Alexa Fluor 647 labeled

5 nmole

pnabio

F1020

TelC probe for arthropods, Alexa Fluor 488 labeled

5 nmole

pnabio

F2001

C-rich telomere probe, Biotin labeled

5 nmole

pnabio

F3001

Centromere probe, FAM labeled

5 nmole

pnabio

F3002

Centromere probe, Cy3 labeled

5 nmole

pnabio

F3005

Centromere probe, Cy5 labeled

5 nmole

pnabio

F3004

Centromere probe, Alexa Fluor 488 labeled

5 nmole

pnabio

F3008

Centromere probe, Biotin labeled

5 nmole

pnabio

F3003

Centromere probe, Cy3 labeled

5 nmole

pnabio

F3006

Centromere probe, FAM labeled

5 nmole

pnabio

F5001

CAG repeats, Cy3 labeled

5 nmole

pnabio

G2001-3

A set of 4 PNA oligos against human globin,

3 nmole

pnabio

G2001-10

A set of 4 PNA oligos against human globin

10 nmole

pnabio

MP01-25

ggcaagtgttcttcgga

25 nmole

pnabio

MP01-50

ggcaagtgttcttcgga

50 nmole

pnabio

PP01-25

ggctcaaccctggacag

25 nmole

pnabio

PP01-50

ggctcaaccctggacag

50 nmole

pnabio

RV01

Surrogate reporter vector with GFP for FACS

5 ug

pnabio

RV02

Surrogate reporter vector with GFP and H2KK for MACS

5 ug

pnabio

RV03

Surrogate reporter vector with GFP and Hygromycin-R

5 ug

pnabio

CV01

Cas9 co-transfection vector (CMV promoter)

5 ug

pnabio

CV02

Cas9, Hygromycin R, and GFP expression vector (CMV promoter)

5 ug

pnabio

CV03

Cas9, RFP, puromycin R expression vector (CMV promoter)

5 ug

pnabio

CV11

Cas9 co-expression vector (EF1a promoter)

5 ug

pnabio

CV12

Cas9, Hygromycin R, and GFP expression vector (EF1a promoter)

5 ug

pnabio

CV13

Cas9, RFP, and Puromycin R expression vector (EF1a promoter)

5 ug

pnabio

FMA-1001

Fmoc-A(Bhoc)-aeg-OH

1 g / 2 g

pnabio

FMG-1001

Fmoc-G(Bhoc)-aeg-OH

1 g / 2 g

pnabio

FMC-1001

Fmoc-C(Bhoc)-aeg-OH

1 g / 2 g

pnabio

FMT-1001

Fmoc-T-aeg-OH

1 g / 2 g

pnabio

FMO-1001

Fmoc-AEEA-OH

1 g / 2 g

pnabio

PNAC-1002

PNAClamp KRAS Kit (v2)

30 tests

pnabio

PNAC-1003

PNAClamp KRAS Kit (v3)

25 tests

pnabio

PNAC-1004

PNAClamp KRAS Kit (plus)

25 tests

pnabio

PNAC-1006

PNAClamp KRAS Kit (v4)

25 tests

pnabio

PNAC-1101

PNAClamp NRAS Kit (v4)

25 tests

pnabio

PNAC-2001

PNAClamp BRAF Kit

50 tests

pnabio

PNAC-3002

PNAClamp EGFR Kit

25 tests

pnabio

PNAC-4002

PNAClamp PIK3CA Kit

25 tests

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PNAC-5001

PNAClamp IDH1 Kit

25 tests

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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司是實(shí)驗(yàn)試劑一站式采購服務(wù)商

1:強(qiáng)大的進(jìn)口輻射能力,血清、抗體、耗材、大部分限制進(jìn)口品等。

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6:我們還是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等幾十家國外公司授權(quán)代理。

7:我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批發(fā),歡迎合作。

 

 

Pnabio代理   Pnabio中國代理   Pnabio北京代理     Pnabio上海代理

 

 

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