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viagenbiotech白介素試劑盒的操作使用步驟你知道嗎

更新時間:2025-09-07點擊次數:467
  白介素是一類重要的細胞因子,在免疫調節、炎癥反應、細胞增殖與分化等生理和病理過程中發揮關鍵作用。viagenbiotech白介素試劑盒是科研和臨床實驗室中用于定量檢測血清、血漿、細胞培養上清等樣本中白介素(如IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10等)濃度的常用工具。其檢測結果的準確性依賴于規范的操作流程。以下是正確使用viagenbiotech白介素試劑盒的標準步驟。
  一、實驗前準備
  試劑與樣本恢復至室溫:將viagenbiotech白介素試劑盒各組分(包被板、標準品、酶結合物、稀釋液、洗滌液等)從2-8℃冰箱取出,平衡至室溫(約30分鐘),避免冷凝水影響反應。
  配制洗滌液:濃縮洗滌液使用前需用蒸餾水或去離子水按比例稀釋(如1:20),充分混勻。若有結晶,先于37℃溶解并冷卻后再稀釋。
  標準品復溶與梯度稀釋:按說明書用稀釋液溶解標準品,配制成高濃度原液,然后進行倍比稀釋(如1:2),建立標準曲線(通常6-8個濃度點),同時設空白孔(只加稀釋液)。
  二、加樣操作
  加標準品與樣本:將標準品和待測樣本(血清、血漿等需按要求稀釋)分別加入已包被特異性抗體的微孔板中,每孔100μL,設復孔以提高準確性。
  封板:用封板膜覆蓋板孔,防止污染和蒸發。
  三、孵育與洗滌
  第一次孵育:將微孔板置于37℃恒溫箱中孵育1-2小時(具體時間依試劑盒而定),使樣本中的白介素與固相抗體充分結合。
  洗滌:孵育結束后,手工或自動洗板機用洗滌液沖洗微孔5-6次,每次注滿并停留30秒,拍干殘液,避免交叉污染。
  四、酶標抗體結合
  加酶結合物:每孔加入100μL酶標二抗(如HRP標記的抗白介素抗體),封板后37℃孵育1小時。
  再次洗滌:重復洗滌5-6次,去除未結合的酶標抗體。
  五、顯色與終止
  加顯色劑:每孔加入100μL顯色底物(如TMB溶液),避光37℃孵育15-30分鐘,觀察顏色變化。
  加終止液:每孔加入50μL終止液(如2MH2SO2),使反應終止,溶液由藍色變為黃色。
  六、讀數與數據分析
  測定吸光度:在15分鐘內使用酶標儀在450nm波長讀取各孔OD值,參考波長可設為630nm進行雙波長校正。
  繪制標準曲線:以標準品濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,繪制標準曲線。
  計算樣本濃度:根據樣本OD值在標準曲線上查得對應濃度,再乘以稀釋倍數,即為實際濃度。
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