線性聚乙烯亞胺PEI MW40000說明書

上海起發(fā)生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬于上海起發(fā)實驗試劑有限公司（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌，打造優(yōu)質(zhì)的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時，把好生物產(chǎn)業(yè)鏈中的國產(chǎn)生物試劑品質(zhì)關(guān)。未來讓每一個和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè)，共同創(chuàng)世界優(yōu)秀的中國生物制造企業(yè)，圓夢中國。

產(chǎn)品描述：

BIOHUB 線性聚乙烯亞胺PEI MW25000 轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）的產(chǎn)品，因其較高的轉(zhuǎn)染效果，已廣泛應用于AAV，LV和重組蛋白等工業(yè)化生產(chǎn)。

聚乙烯亞胺是一種具有較高陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔兩個碳原子，即每第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質(zhì)子海綿"體(proton sponge)，因此，非常容易結(jié)合帶負電荷的核酸分子，形成帶正電荷的復合物顆粒，該顆粒與細胞表面陰離子結(jié)合，很容易通過內(nèi)吞作用進入細胞；并且可抵御溶酶體的降解作用，從而提高核酸分子的表達水平。

基本信息：

CAS： 9002-98-6

分子式： (CH2CH2NH)n

分子量： 25,000

熔點： 73-75℃

溶解性： 溶于熱水，低pH值的冷水，甲醇和乙醇；

形式： 白色固體

生物毒性： 未知

安全防護 手套及口罩

存儲 PEI 內(nèi)含自由氨基，建議開封后 4℃干燥保存，減緩氧化過程。

效期：3年

運輸： 常溫

特點：大量實驗數(shù)據(jù)反饋，細胞通用性好，有非常好的轉(zhuǎn)染效果，尤其對293，CHO細胞系有特別顯著的轉(zhuǎn)染效果。

配置方法：

轉(zhuǎn)染操作流程：(貼壁細胞轉(zhuǎn)染方法)

   1. 接種細胞： 轉(zhuǎn)染前一天，用膠原酶（BIOHUB Cat#78CL10002)消化細 胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置 入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到 70~80%。

   2. 準備 DNA-PEI 復合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升 至室溫。依據(jù)表 1 所示，用 Opti-MEM ITM或其他適合的無蛋白培 養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線 性 PEI 轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批 DNA 比例可 能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性 PEI 轉(zhuǎn)染 試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI 復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。

   3. 轉(zhuǎn)染細胞： 直接向每個孔中加入 DNA-PEI 復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在 無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴 DNA-PEI 復合 物。轉(zhuǎn)染 3 h 后，添加?體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基。

   4. 孵育細胞和分析結(jié)果： 在 CO2 培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染 后最快 7 h 即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。

   5. 轉(zhuǎn)染 24 h 后，將細胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（將細胞稀釋 10 倍 以上），在 CO2 培養(yǎng)箱中 37℃孵育過夜。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。

轉(zhuǎn)染操作流程：(懸浮細胞轉(zhuǎn)染方法)

   1. 轉(zhuǎn)染前準備：懸浮細胞傳代接種于適量含懸浮細胞生長培養(yǎng)基中，合適條件下培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)瓶大小調(diào)整細胞密度（例100mL培養(yǎng)瓶，1X10 ⁶ cells/mL），然后旋緊瓶口放入搖床繼續(xù)培養(yǎng)，2~4小時后可以進行轉(zhuǎn)染。

   2. 準備 DNA-PEI 復合物：DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無血清培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。

   3. 轉(zhuǎn)染細胞：將PEI-DNA轉(zhuǎn)染復合物逐滴加入到細胞培養(yǎng)液中，搖勻后旋緊瓶口放回搖床合適培養(yǎng)條件下培養(yǎng)至可以分析檢測。

   4. 孵育細胞和分析結(jié)果：轉(zhuǎn)染后一般24-72h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。 請自行確定適合檢測時間。

   5. 如果要獲得更多的蛋白產(chǎn)量，有文獻表明轉(zhuǎn)染后24小時，可以適當稀釋細胞，稀釋比例參考范圍（1:1—1:5）之間，可以增加蛋白產(chǎn)量，稀釋效應與最佳稀釋比率應根據(jù)經(jīng)驗確定。

產(chǎn)品背景：

BIOHUB 生產(chǎn)的78Bio PEI是一種優(yōu)化的線性陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑,分子量分別為 25000 和 40000，78BioPEI40000 相比 25000 轉(zhuǎn)染效率高，但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表達系統(tǒng)中，相比于市面上的脂質(zhì)體 78BioPEI 都表現(xiàn)出高的蛋白表達量（無 論是 96 孔板還是 100L 的細胞反應器），以及更小的細胞毒性、更高的轉(zhuǎn)染效和更高的可 重復性，并且十分經(jīng)濟的高性價比轉(zhuǎn)染試劑。產(chǎn)品具有以下特點：

1.轉(zhuǎn)染效率高，細胞毒性低；  蛋白表達量高；

2.節(jié)約成本：BIOHUB 78 PEI轉(zhuǎn)染試劑 ，進口品質(zhì)，親民價格，至少能夠降 40% 的轉(zhuǎn)染試劑總成本；

3.適用于 HEK293 等真核細胞的轉(zhuǎn)染；

4.適用于貼壁細胞和懸浮細胞的轉(zhuǎn)染；

5.適用于有血清和無血清的轉(zhuǎn)染條件；

6. 無機試劑，無動物源成分；

7. 產(chǎn)品穩(wěn)定，質(zhì)控嚴格；

8. 工藝流程適用范圍廣，容易優(yōu)化 適合小規(guī)模培養(yǎng)板，培養(yǎng)瓶到大規(guī)模的生物反應器。

產(chǎn)品反饋：

注意事項：

1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2. 本產(chǎn)品主要用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

3.加熱或加酸都有助于 78BioPEI 溶解。當然酸可能不用加那么多，詳細用量可試加一點 ,攪拌看看，足夠溶解就行，不一定需要加到 pH 那么低。

4.一定要溶解充分，溶解不充分會影響后續(xù)的轉(zhuǎn)染效率.

5.冷凍后可能會影響其后續(xù)轉(zhuǎn)染效果。

特別提醒：初次使用 78PEI 進行不同基因轉(zhuǎn)染時應先做預試，優(yōu)化出適合自己實驗的， 最佳 PEI 和 DNA 的比例，通常篩選范圍在 1:1 到 5:1 之間，如果之前用過Polysciences品牌的 PEI，我們的活性是其1.5倍左右，用 78BioPEI 時應適當降低使用濃度。